實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
羊膜細(xì)胞；WISH | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63267 |
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細(xì)胞名稱 羊膜細(xì)胞；WISH
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 最初以為這株細(xì)胞的起源是正常羊膜，但隨后通過(guò)同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋法分析，證實(shí)該細(xì)胞是HeLa細(xì)胞污染的；角蛋白陽(yáng)性。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:10傳代；每周換液2次。
傳代情況: P180
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
小鼠腹水瘤細(xì)胞；EAC-E2G8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Porcine CCL4/MIP-1β Elisa Kit
鋅原卟啉NSF (D31C7) XP® Rabbit mAb2-溴丁酸酯
美伐他汀,康百汀SNAP25 (D110) Antibody(S)-1-溴-2-甲基丁烷
美伐他汀(標(biāo)準(zhǔn)品)PKA RI-α/β Antibody1,2-戊二
6-氨基青霉烷酸PhosphoPlus® Syk (Tyr525/526) Antibody Duet溴-甲
L-天門冬酰酶,門冬酰酶Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Biotinylad)-甲氧基
2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二甲酸二鈉(BCA)CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb10-溴-1-癸
魏因勒卜鏈接劑,N-芴甲氧羰基-N-甲氧基-氨基酸CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb(溴?；?吡啶鹽
N-Fmoc-D-1,2,3,四氫異喹啉-羧酸Rab3A Antibody2-氟-5-三氟
N-芐氧羰基-L-氨酸SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)(S)-羥基丁酸甲酯
N-芐氧羰基-L-谷氨酰Vimentin (R28) Antibody2-噻吩-5-磺酰
N-CBZ-L-氨酸Ubiquitin Antibody甲基磺酰芐溴
鹽酸美卡因PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbalpha-溴代-酮
N-芐氧羰基-L-Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAb2-溴-甲酸
N-芐氧羰基-L-Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAb異基甲酸
N-CBZ-beta-氨酸HMGB1 Antibody氨基-5-吡唑
CBZ-D-α-芐酯Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb基吡啶
N-芐氧羰基-L-Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb環(huán)基-氧代丁酸,95%
Z-L-甲酯CYR61 (E5W3H) Rabbit mAb7-溴-1H-吲唑
鈉Hemoglobin γ (D4K7X) Rabbit mAb基富馬酸
CBZ-D-FoxO3a (75D8) Rabbit mAb (Biotinylad)L-beta-高鹽酸鹽
Z-Arg(Mtr)-OH·CHAPhospho-Stat5 (Tyr694) (C71E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)6-溴藜蘆
CBZ-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽;N(ε)-芐氧羰基-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽PathScan® Total Tyro3 Sandwich ELISA Kit檸檬
N-CBZ-D-氨酸Phospho-SHIP1 (Tyr1020) Antibody(溴基)二甲基
BOC-L-氨酸DUSP6/MKP3 Antibody對(duì)肼
BOC-L-氨酸Abi1 (D3G6C) Rabbit mAb戊酸酯
BOC-Neogenin (D7M8E) Rabbit mAb2-氨基噻唑-甲酸酯
BOC-L-異Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,6-二異
BOC-L-Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (Biotinylad)對(duì)甲砜基甲
BOC-L-HDAC3 (7G6C5) Mouse mAb-1H-吡唑并[3,d]嘧啶
BOC-L-天冬氨酸HDAC3 (7G6C5) Mouse mAb三氟磺酸鋅
BOC-L-SOCS1 (A156) Antibody1,二氟
BOC-L-SOCS1 (A156) Antibody酚
N-叔丁氧羰基-L-MST2 Antibody1-烷
BOC-L-MST2 Antibody氨基炔
BOC-L-HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)2-氨基-5--硝基吡啶
BOC-L-天冬酰Phospho-MEK1/2 (Ser217/221) (41G9) Rabbit mAb (Biotinylad)二酸二叔丁酯
特性: 成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Porcine TLR9 Elisa Kit
羊膜細(xì)胞；WISH小鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒BKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒BKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒BLC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒BLIELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒BLIELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素9(IL-9)ELISA試劑盒BLNKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒BMG/β2-MGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒BMP-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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