實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
大鼠肺細(xì)胞；WTRL1 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63756 |
?
細(xì)胞名稱(chēng) 大鼠肺細(xì)胞；WTRL1
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性大白鼠的肺組織。1984年由中國(guó)*昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳代方法: 1：2傳代；3-4天一次
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase *儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase*儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將*成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% *和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除*細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用*細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除*細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
2"-O-Glucosylrutin
CAS No.：55696-55-4
中文名：
分子式：C33H40O21
人絨毛膜*β亞 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷合酶(ADSS) 規(guī)格： 240ng/0.5mL/支
醋可的松 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷高半胱解酶(AHCY) 規(guī)格： 100mg
豨薟草（腺梗豨薟） 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷脫酶(ADA) 規(guī)格： 2g
2基5二(卓雜質(zhì)I) 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷裂解酶(ADSL) 規(guī)格： 50mg/支
哆辛(*6) 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶1(ADCY1) 規(guī)格： 100mg
潑松龍 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶10(ADCY10) 規(guī)格： 100mg
訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶10(ADCY10) 規(guī)格： 100mg
金毛耳草(黃毛耳草) 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶2(ADCY2) 規(guī)格： 3g
5羥基糠醛 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶3(ADCY3) 規(guī)格： 10mg
*雜質(zhì)S9780（*拉） 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶4(ADCY4) 規(guī)格： 50mg
* 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶5(ADCY5) 規(guī)格： 100mg
侖林 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶6(ADCY6) 規(guī)格： 100mg
賽庚啶 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶7(ADCY7) 規(guī)格： 50mg
牡丹皮 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶8(ADCY8) 規(guī)格： 1g
* 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶9(ADCY9) 規(guī)格： 100mg
1羥基3,4,5三氧山 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶關(guān)聯(lián)蛋白1(CAP1) 規(guī)格： 10mg
基 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷環(huán)酶關(guān)聯(lián)蛋白2(CAP2) 規(guī)格： 100mg
瓜子金 訂購(gòu)|咨詢(xún) 腺苷激酶1(AK1) 規(guī)格： 1g
Factor VII light chain *VII 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml 3,5Dinitrosalicylic acid
Myosin VIIa/DFNB2 肌球蛋白7a/常染色體隱性耳聾蛋白2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Sodium malonate
Factor X *10抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Sodium phosphate, monobasic, dihydrate
NIR2 膜脂轉(zhuǎn)移蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Malonate
NUSAP1 核仁和紡錘體相關(guān)蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Manganese (II) chloride, tetrahydrate
RAB35 RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab35抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Casein
RACGAP1 Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Vaseline
phosphoRACGAP1(Ser387) Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Sodium orthovanadate
丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Butamben
羥酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Propylparaben
氟伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:350mg 英文名稱(chēng)：Fluvastatin Sodium
勞拉西相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱(chēng)：Lorazepam Related Compound C
環(huán)沙星甲酰標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:125mg 英文名稱(chēng)：Ciprofloxacin Formamide
*標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Glimepiride
太林相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱(chēng)：
萬(wàn)拉法新相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:10mg 英文名稱(chēng)：
愈創(chuàng)木酚甘標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Guaifenesin
*標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Enrofloxacin
大鼠肺細(xì)胞；WTRL1NaCl賴(lài)氨脫羧酶肉湯規(guī)格：20支詳情介紹
無(wú)菌液體石蠟規(guī)格：1ml*20用途：用于微生物配套試劑
去氧膽鈉規(guī)格：100g用途：用于抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)
可溶性淀粉培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于微生物的淀粉水解試驗(yàn)
Raka-Ray 培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于啤酒中乳菌檢測(cè)和分離培養(yǎng)
改良*卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base規(guī)格：250g用途：用于蠟樣芽孢桿菌的固體平板計(jì)數(shù)無(wú)需添加卵黃，高壓滅菌，只加入*即可（GB.SN標(biāo)準(zhǔn)）
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