鴨極低密度脂蛋白（VLDL）酶聯(lián)免疫elisa分析試劑盒的間接法
點擊次數(shù)：1399 更新時間：2020-12-22
鴨極低密度脂蛋白(VLDL)酶聯(lián)免疫elisa分析試劑盒檢測未知抗體的間接法:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。
2.次日洗滌3次。
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,一遍用DDW洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
競爭法的簡要操作步驟：
1）先加入特異性抗原，使抗原固定結(jié)合于載體表面；
2）加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標(biāo)抗體混合物，并做只加酶標(biāo)抗體的對照組；
3）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，對比實驗組及對照組的顯色差異，計算未知抗體的量。
