發(fā)光細(xì)菌法的測(cè)定方法
1．生物測(cè)試法——發(fā)光細(xì)菌法
利用污染物對(duì)革蘭氏陰性兼性厭氧微生物所發(fā)射出的藍(lán)綠光強(qiáng)度的影響，來(lái)判斷水質(zhì)受污染的情況。ELISA試劑盒
發(fā)光細(xì)菌是一種非致病性的普通細(xì)菌，具有發(fā)光能力，正常條件下，經(jīng)培養(yǎng)后能發(fā)出肉眼可見綠色光．波長(zhǎng)490nm。凡是干擾或損害細(xì)菌呼吸或生理過(guò)程的任何因素都能使細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度立即發(fā)生改變。并隨毒物濃度增加．發(fā)光強(qiáng)度減弱。
這一特性可用于污水和地面水中污染物毒性的測(cè)定．具有較高的靈敏度和重現(xiàn)性，特別是測(cè)定綜合毒性。如重金屬、CN、酚類化合物、抗生素等對(duì)其發(fā)光過(guò)程具有毒害作用。
發(fā)光細(xì)菌法的測(cè)定方法如下：
(1)新鮮發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)物測(cè)定法
發(fā)光細(xì)菌液體在發(fā)光培養(yǎng)基中培養(yǎng)(至對(duì)數(shù)生)，稀釋至適當(dāng)濃度后，加入測(cè)試管中，再加入試液，作用10～20min后，讀出并記錄對(duì)照管和樣品管發(fā)光強(qiáng)度變化數(shù)據(jù)。
(2)發(fā)光細(xì)菌與海藻混合測(cè)定法
利用有毒物質(zhì)對(duì)發(fā)光細(xì)菌沒(méi)有直接毒害作用，而對(duì)藻類有毒害作用的特點(diǎn)，把培養(yǎng)好的發(fā)光細(xì)菌懸浮液和培養(yǎng)好的藻類懸浮液混合后加入測(cè)試管，光照一段時(shí)間后再測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度的變化。因?yàn)槎疚锏淖饔檬乖孱惙叛跄芰ο陆?，發(fā)光細(xì)菌發(fā)光能力也下降。ELISA試劑盒
(3)冷凍干燥發(fā)光細(xì)菌制劑測(cè)定法
將已培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生的發(fā)光細(xì)菌制成干燥粉劑，在冰箱中冷藏，使用時(shí)取出．加入重沖液保溫平衡10～15min，恢復(fù)到干燥前的生理狀態(tài)進(jìn)行試驗(yàn)。
2．細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)法
在實(shí)際工作中，經(jīng)常以檢驗(yàn)細(xì)菌總數(shù)，特別是檢驗(yàn)作為糞便污染的指示細(xì)菌，如總大量菌群、糞大腸菌群、糞鏈球菌、腸道病毒等，來(lái)間接判斷水的衛(wèi)生學(xué)質(zhì)量。
(1)水樣采集
采集細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)用水樣，必須嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求進(jìn)行；防止在運(yùn)輸過(guò)程中被染，并應(yīng)迅速進(jìn)行檢驗(yàn)。一般從采樣到檢驗(yàn)不宜超過(guò)2h；在10℃以下冷藏保存不得超過(guò)6h。
采集江、河、湖、庫(kù)等水樣，可將采樣瓶沉人水面下10～15cm處，瓶口朝水流上游方同．使水樣灌人瓶?jī)?nèi)。需要采集一定深度的水樣時(shí)，用采水器采集。采集自來(lái)水樣，首先用酒精燈灼燒水滅菌或用70％的酒精消毒，然后放水3min．再采集約為采樣瓶容積翦80％的水量。
(2)細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)法
水污染的細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)指標(biāo)有以下兩個(gè)：
①細(xì)菌總數(shù) 細(xì)菌總數(shù)指lmI，水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃、24h培養(yǎng)后所生蘭的細(xì)菌菌落總數(shù)。它可反映水體微生物污染的程度，如每1mL自來(lái)水中細(xì)菌總數(shù)不礙超過(guò)10個(gè)(具體檢測(cè)方法見項(xiàng)目三)。
②大腸菌群數(shù) 大腸桿菌是一群需氧和兼性厭氧的、能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿狀細(xì)菌。主要來(lái)源于人畜糞便中，在腸道中普遍存在并且是數(shù)量zui多的一種。故大腸桿菌群被當(dāng)作監(jiān)測(cè)水體是否受糞便污染的指標(biāo)。總大腸菌群是指那些能在3j℃、48h之內(nèi)使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸、產(chǎn)氣．需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性的無(wú)芽孢桿菌，以每升水樣中所含有的大腸菌群的數(shù)目表示。大腸菌群數(shù)指每升水樣中含有的大腸菌群的數(shù)量。如每升飲用水中大腸菌群數(shù)不得超過(guò)3個(gè)。大腸菌群數(shù)量的測(cè)定：多管發(fā)酵法和濾膜法(具體檢測(cè)方法見項(xiàng)目四)；ELISA試劑盒
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